方法:建立白色念珠菌角膜炎小鼠模型和热灭活白色念珠菌(HKCA)激发的人角膜上皮细胞(HCECs)体外培养模型。通过临床评分评估角膜感染的程度。使用RT-PCR评估基因表达,并进行Western blot或免疫荧光评估蛋白质表达。进行TUNEL染色以检查细胞焦亡,进行LDH释放测定以评估细胞毒性。
结果:对假模型对照相比,白念模型角膜中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GSDMD的mRNA水平显著升高。NLRP3的蛋白质表达和含有CARD(ASC)的细胞焦亡相关标志物凋亡相关瘢点样蛋白、劈裂的CASP1、劈裂的N-GSDMD、劈裂的IL-1β和劈裂的IL-18以及细胞焦亡在白色念珠菌角膜炎的小鼠模型中显著增加。更重要的是,NLRP3敲低显著减轻了焦亡,从而减少了白色念珠菌角膜炎的角膜炎症反应。在体外,暴露于HKCA的HCEC中验证了活化的NLRP3炎症小体和细胞焦亡的存在。此外,钾(K+)通道抑制剂格列本脲可以减低暴露于HKCA的HCEC中的LDH释放并抑制NLRP3活化和细胞焦亡。
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