2024年2月5日星期一

脉络膜形态和感光活动与近视发展相关并受到影响

  • 作者：Alexandra Benavente-Perez，纽约州立大学视光学院生物与视觉科学系
  • 目的：
    • 脉络膜对于调节眼睛生长至关重要，并参与近视相关眼部并发症的发病机制。
    • 本研究探讨了晶状体引发的近视的绒猴（Callithrix Jacchus）脉络膜生物特征、光感受器活性和近视生长之间的关系。
  • 方法：
    • 本研究共纳入34只年龄92至273天的普通绒猴。
    • 使用负性软隐形眼睛在17只绒猴中诱发轴性近视，并以17只绒猴作为未经治疗的对照。
    • 分别使用自动验光和A超扫描检测散瞳验光（RE）和玻璃体腔深度（VCD）。使用谱域光学相干断层扫描获得脉络膜扫描并以二值化（binarized）以计算中心凹下脉络膜厚度（ChT）、脉络膜总面积（TCA）、管腔面积（LA）、基质面积（SA）、脉络膜血管指数（CVI）和LA/SA
    • 为了评估感光器活性，测量了全视野视网膜电图的a波。
    • 回归模型用于研究结果测量之间的关系。
  • 结果：
    • 被诱导了轴性近视的眼睛表现出了脉络膜所有参处的显著降低。这些改变伴随屈光功能和玻璃体伸长和A波改变
    • 此外，多元回归表明ChT和CVI的组合可以很好地预测RE和VCD。
  • 结论：
    • 本研究报告了近视引起的非人类领涨动物的眼睛脉络膜形态存在显著改变。
    • 脉络膜解剖结构的变化与光适应a波幅度的降低有关。
    • 这些发现可能代表了严重近视眼中视觉性能下降和脉络膜视网膜并发症的早期标志。
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多巴胺受体1治疗通过抑制NOD样受体蛋白3相关炎症促进角膜损伤的上皮修复

  • 作者：Jianmin Hu，福建医科大学
  • 目的：
    • 阐明多巴胺受体1（DRD1）对炎症条件下小鼠角膜上皮细胞（MCEC）增殖的影响。
  • 方法：
    • 在体外，用IL-1β（含或不含pcDNA3.1_DRD1）处理永生化的MCEC（iMCEC）。
    • 原代MCED（pMCEC）暴露与IL-1β，有或没有DRD1激动剂（A68930）。
    • 使用CCK-8测量Ki-67和p63免疫染色与细胞增殖进行定量。
    • 评估NOD样受体蛋白3（NLRP3）、IL-1β和IL-6的表达水平。
    • 建立小鼠角膜损伤模型，2mm浅表角膜切除术。
    • 受伤后最多5天，每天的对受伤的眼睛局部施用3次0.1% A68930或PBS
    • 免疫荧光分析角膜中Ki-67、p63和CD45的表达
    • 利用蛋白质印迹和实时定量PCR对小鼠角膜中的DRD1、NLRP3、IL-1β和IL-6进行定量分析。
    • 在损伤后长达5天的时间内通过荧光素钠染色监测角膜上皮再生。
  • 结果：
    • 体外过表达DRD1和A68930可促进MCED增殖并抑制NLRP3和IL-1β和IL-6的表达。
    • 与PBS治疗相比，小鼠机械性角膜损伤后局部应用1% A68930导致Ki-67和p63表达增加。
    • 此外，局部施用0.1% A68930降低了CD45、NLRP3和IL-1β和IL-6的表达。
    • 荧光素钠分析表明0.1% A68930治疗组角膜上皮再生加速
  • 结论：
    • DRD1治疗可抵消NLPR3相关炎症并促进角膜损伤的上皮修复
  • Hsiou：
    • 角膜受伤后的DRD1如何表达？
    • DRD1是表达在角膜上皮细胞？
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2024年2月4日星期日

KCNK5通过TNFSF10介导干眼自噬调节钾流出并诱导角膜上皮细胞焦亡

  • 作者：Jin Yuan，中山眼科中心
  • 目的：
    • 钾二孔结构域通道亚家族K成员5（Potassium two pore domain channel subfamily K member 5，KCNK5）-介导的钾外流参与干眼发病机制，以及相关的分子机制。
  • 方法：
    • 皮下注射东莨菪碱，诱导小鼠实验性干眼，进行干燥应激
    • 对人角膜上皮细胞系施加干燥应激。
    • 细胞内钾离子定量：电感耦合等离子体质谱法
    • 细胞死亡CCK-8
    • 基因表达谱分析：RNAseq、qRT-PCR
    • 蛋白质分析：WB、免疫荧光
    • 角膜上皮缺损：荧光素钠
    • 泪液分泌定量：酚红棉线法
  • 结果：
    • 钾流出促进细胞焦亡
    • KCNK5在体内、体外的干眼模型中高表达。
    • 体外模型：KCNK5的过度表达可诱导钾外流并激活NLR家族Pyrin结构域3（NLRP3）炎症体介导的细胞焦亡；沉默KCNK5可以有效减轻干眼症的细胞焦亡
    • KCNK5的过度表达会导致TNF超家族成员10下调，并损害自噬。
    • 补充TNFSF10可以促进自噬并减轻干眼症的细胞焦亡。
  • 结论：
    • KCNK5上调介导TNFSF10损害自噬并诱导干眼细胞焦亡。
    • 针对KCNK5可能代表了一种新颖且有前途的干眼治疗干预方法。
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探索角膜新生血管形成：在碱烧伤小鼠模型中使用转录组学和蛋白质组学的综合方法。

  • 作者：Yiyong Qian，上海十院眼科
  • 目的：
    • 角膜新生血管损害角膜透明度和视力。
    • 该研究旨在加深对碱烧伤诱导新生血管相关分子的理解，促进更好地掌握新生血管机制，并发现潜在的治疗靶点。
  • 方法：
    • 模型：小鼠，碱烧伤。
    • 烧伤后3、7、14天进行角膜炎观察和组织学检查
    • 对正常角膜进行基于RNA测序的转录学和无标记定量蛋白质组学的综合分析。
    • 应用生物信息学方法，包括GO、KEGG分析，识别差异表达基因DEG和关键信号通路，使用qRT-PCR和WB验证四个潜在的新生血管相关基因。
  • 结果：
    • 在第七天观察到显著的新生血管
    • 41个基因在新生血管化的角膜中存在差异表达，其中15个基因在mRNA和蛋白质水平上表达上调，26个基因表达下调。
    • 生物信息学分析表明，这些DFG参与多种生物过程，包括视黄醇和视黄酸代谢、中性粒细胞趋化性和肌动蛋白丝组装，以及细胞色素P450、酪氨酸和苯丙氨酸代谢等重要的富集途径。
    • 拎包细胞胞质蛋白1和富含办光氨酸和甘氨酸的蛋白2基因上调，转谷氨酰胺酶2和转化生长因子-β诱导基因下调。
  • 结论：
    • 碱烧伤7天后小鼠角膜中基因表达差异，发现41个基因表达发生改变。
    • 这些基因在CNV中的确切作用尚不清楚，但探索血管生成相关分析为CNV治疗或预提供了潜力。
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2024年1月31日星期三

进行性近视发展中的先天免疫反应性炎症

作者：Lingyun Cheng，温医
目的：
  • 炎症与近视的发生有关。
  • 目前尚不清楚近视病程中何时出现炎症，以及炎症的特点。
  • 在该研究中，作者检测了具有广谱屈光状态的眼房水中的细胞因子以分析炎症。
方法：
  1. 使用ELISA检测142例患者眼房水中的可溶性细胞间粘附分子（sICAM-1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和转化生长因子β2（TGFβ2）.
  2. 这些患者的眼轴长范围从正视眼到高度近视。
结果：
  1. 142例患者的平均眼轴长度为25.51±3.31mm（21.56-34.37mm）
  2. 三分区间25（25%），69（50%），37（25%）。
  3. 葡萄肿眼和黄斑劈裂眼中sICAM-1和MCP-1显著高于对照组。
  4. 调整年龄、性别，三种细胞因子均和眼轴长度呈正相关。
  5. sICAM-1关联最强，TGFβ2最弱，MCP-1介于两者之间
结论：
  • 眼球内液体中的sICAM-1和MCP-1可能是进行性高度近视和潜在自身免疫炎症的指示性生物标志物。
  • sICAM-1可用作病理性近视发展的监测生物标志物。
文献：
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2024年1月30日星期二

FOXM1通过METTL3/YTHDF2上调APOA1表达参与近视巩膜重塑

作者：Lei Shi，安徽省眼科医院
目的：
载脂蛋白A1（Apolipoprotein， A1）是人类病理性近视的潜在关键蛋白和治疗目标。
本研究旨在发现APOA1在近视巩膜重塑中的功能及其潜在机制。
方法：
  1. 利用缺氧诱导近视细胞模型。
  2. 在功能丧失和获得实验之后，通过RT-qPCR和WB检查近视细胞模型中肌成纤维细胞转分化相关和胶原蛋白生成相关因子Forkhead box M1（FOXM1）、APOA1和甲基转移酶样3（METTL3）的表达，
  3. 分别通过CCK-8和流式细胞术测定增殖和凋亡
  4. 采用染色质免疫沉淀（ChIP）检测METTL3启动子中FOXM1的富集情况，采用甲基化RNA免疫沉淀（Me-RIP）检测APOA1的N6-甲基腺苷（m6A）修饰水平，并采用光活化核糖核苷增强交联和免疫沉淀（PAR-ClIP）检查METTL3和APOA1之间的结合。
结果：
  1. 缺氧诱导的人巩膜成纤维细胞（HSF）APOA1和FOXM1高表达，METTL3低表达。
  2. FOXM1敲除升高METTL3表达并下调AOA1表达。
  3. FOXM1在METTL3的启动子中富集。
  4. APOA1或FOXM1敲低或METTL3过表达可逆转缺氧引起HSF中的纽蛋白、桩蛋白和α-SMA水平和细胞凋亡的升高以及胶原蛋白、I型、α1（COL1A1）水平和细胞增殖的减少。
  5. METTL3或YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白F2（YTHDF2）敲低或APOA1过表达逆转了FOXM1敲低对纽蛋白、桩蛋白、α-SMA和COL1A1表达以及细胞增殖和凋亡的影响。
结论：
FOXM1通过抑制METTL3转录在提高APOA1和m6A甲基化水平，并通过减少YTHDF2识别的m6A甲基化转录本来增强APOA1 mRNA的稳定性和转录。

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2024年1月29日星期一

跨膜蛋白CMTM6减轻实验性干眼症的眼部炎症反应并改善角膜上皮屏障功能

作者：Hong Qi，北京大学

目的

探讨跨膜蛋白CMTM6对干眼病（Dry EYE Disese，DED）发病机制的影响并阐明其潜在机制

方法

1. 通过数据分析、qRT-PCR、Western Bloting和免疫组化证实CMTM6的表达。
2. 使用酚红线测试检测泪液分泌。
3. 通过流式细胞术评估免疫细胞浸润。
4. 通过荧光素钠染色、闭锁带1（Zonula Occludens 1， ZO-1）免疫荧光染色和细胞-基质阻断抗感染（ECIS）评估来评估屏障功能。
5. 采用siRNA和shRNA沉默CMTM6，慢病毒介导CMTM6过表达。
6. 通过qRT-PCR和细胞技术珠阵列（Cytometric bead array，CBA）分析来分析促炎细胞因子水平。

结果

1. CMTM6在健康人和小鼠角膜和结膜上皮中表现出高表达，但在DED中显著降低。并且其下调和疾病严重程度相关
2. *Cmtm* <sup>-/-</sup>  干眼小鼠表现出泪液分泌减少、角膜上皮严重缺损、结膜杯状细胞密度降低和炎症反应上调。*Cmtm* <sup>-/-</sup>  干眼小鼠和CMTM6人角膜上皮细胞转化（Human corneal epithelia cell-transformed， HCE-T）细胞表现出更严重的屏障破坏和ZO-1表达减少。
3. HEC-T细胞中CMTM6敲低增加了高渗应急诱导的炎症反应，而CMTM6过表达可显著减轻这种炎症反应。
4. 沉默CMTM6后，高渗刺激的HCE-T细胞中磷酸化p64的水平增加。NF-κB p65抑制JSH-23可逆转CMTM6敲低HCE-T细胞中高渗透压引起的过度炎症反应。

结论

眼表CMTM6表达减少有助于DED的发病，CMTM6-NF-κB p65信号通路可能作为DED的一个有前景的治疗靶点。
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