FOXM1通过METTL3/YTHDF2上调APOA1表达参与近视巩膜重塑

作者：Lei Shi，安徽省眼科医院

目的：

载脂蛋白A1（Apolipoprotein， A1）是人类病理性近视的潜在关键蛋白和治疗目标。

本研究旨在发现APOA1在近视巩膜重塑中的功能及其潜在机制。

方法：

1. 利用缺氧诱导近视细胞模型。
2. 在功能丧失和获得实验之后，通过RT-qPCR和WB检查近视细胞模型中肌成纤维细胞转分化相关和胶原蛋白生成相关因子Forkhead box M1（FOXM1）、APOA1和甲基转移酶样3（METTL3）的表达，
3. 分别通过CCK-8和流式细胞术测定增殖和凋亡
4. 采用染色质免疫沉淀（ChIP）检测METTL3启动子中FOXM1的富集情况，采用甲基化RNA免疫沉淀（Me-RIP）检测APOA1的N6-甲基腺苷（m6A）修饰水平，并采用光活化核糖核苷增强交联和免疫沉淀（PAR-ClIP）检查METTL3和APOA1之间的结合。

结果：

1. 缺氧诱导的人巩膜成纤维细胞（HSF）APOA1和FOXM1高表达，METTL3低表达。
2. FOXM1敲除升高METTL3表达并下调AOA1表达。
3. FOXM1在METTL3的启动子中富集。
4. APOA1或FOXM1敲低或METTL3过表达可逆转缺氧引起HSF中的纽蛋白、桩蛋白和α-SMA水平和细胞凋亡的升高以及胶原蛋白、I型、α1（COL1A1）水平和细胞增殖的减少。
5. METTL3或YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白F2（YTHDF2）敲低或APOA1过表达逆转了FOXM1敲低对纽蛋白、桩蛋白、α-SMA和COL1A1表达以及细胞增殖和凋亡的影响。

结论：

FOXM1通过抑制METTL3转录在提高APOA1和m6A甲基化水平，并通过减少YTHDF2识别的m6A甲基化转录本来增强APOA1 mRNA的稳定性和转录。