角膜成纤维细胞及肌成纤维细胞损伤后线粒体DNA变化

研究的核心问题：线粒体（特别是mtDNA拷贝数和TFAM）在角膜成纤维细胞（CSFs）向肌成纤维细胞（CMFs）转分化及角膜纤维化过程中的作用是否重要？TFAM能否作为调控靶点？实验设计：

• 体外：从健康人角膜分离CSFs，用TGFβ1诱导其向CMFs转分化；
• 离体：用氮芥（NM，一种化学损伤剂）处理整个人角膜制造纤维化模型；
• 干预：利用CRISPR/Cas9敲除/沉默TFAM基因，观察对纤维化标志物的影响；
• 检测手段包括：长距PCR和qRT-PCR测mtDNA含量与转录、免疫荧光/印迹测蛋白、MitoSOX测mtROS。

主要发现：

1. CMFs相比CSFs，mtDNA拷贝数和mtDNA/nDNA比率显著下降；
2. 转分化过程中，纤维化标志物αSMA逐渐升高，而TFAM和多数线粒体基因表达逐渐降低，mtROS显著升高；
3. 沉默TFAM后，纤维化被抑制（αSMA下降），mtDNA反而增加；
4. NM损伤的离体角膜也表现出TFAM降低、αSMA升高的纤维化特征。

结论与意义：
mtDNA减少是角膜纤维化（成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化）的重要特征，而TFAM作为mtDNA转录和拷贝数的关键调控因子，其表达下降促进了纤维化进程。反之，维持或上调TFAM可能抑制病理性纤维化。该研究提示TFAM具有成为角膜损伤后抗纤维化治疗潜在靶点的价值，为后续药物开发或基因治疗提供了方向。
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/41557839/

MDSC 促进小鼠角膜损伤愈合抗炎

1. 研究核心问题

髓系来源抑制性细胞（MDSC）是否能促进角膜上皮闭合、缓解角膜损伤后的炎症反应，及其在角膜愈合中的作用机制。

2. 实验设计

采用体外 + 体内双模型研究，以人角膜上皮细胞、BALB/c 小鼠为研究对象，设置 MDSC 实验组与 CD11b⁺Gr-1⁻细胞 / 生理盐水对照组，从细胞迁移、组织愈合、炎症水平、组织形态多维度检测：

• 体外：划痕实验，共培养角膜上皮细胞与实验 / 对照细胞，定量分析不同时间点伤口面积；
• 体内：建立小鼠角膜上皮损伤模型，结膜下注射实验 / 对照细胞，通过荧光素染色、裂隙灯成像评估上皮愈合，利用实时荧光定量 PCR、流式细胞术检测炎症标志物，苏木精 - 伊红染色做组织学验证。

3. 主要发现

• 体外：MDSC 可显著促进人角膜上皮细胞的迁移能力；
• 体内：MDSC 能加速小鼠角膜上皮伤口闭合，减少中性粒细胞浸润，降低促炎因子 TNF-α、IL-1β 表达，且可恢复角膜上皮的组织完整性。

4. 研究结论与意义

• 结论：MDSC 可加快角膜上皮修复，同时减轻角膜损伤后的急性炎症反应，是角膜愈合过程中的重要修复性免疫调节细胞；
• 意义：首次发现 MDSC 在角膜中具有未被报道的修复功能，为 MDSC 开发成眼表损伤的细胞疗法提供了关键的实验基础和理论依据，为角膜损伤的临床治疗提供了新的潜在靶点。

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/41557839/

慢性束缚应激通过β-肾上腺素和糖皮质激素信号错位角膜生物钟

目的：确定慢性束缚应激（RS）——一种经过炎症的慢性心理应激模型——是否破坏角膜昼夜转录组并改变上皮、神经、免疫和代谢输出，并区分β-肾上腺素能信号和糖皮质激素信号的相对贡献。

方法：

• 雄性C57BL/6J小鼠在ZT3（Zeitgeber Time 3）每天接受2小时束缚应激，连续14天。

• 各组分别接受普萘洛尔（propranolol）、美替拉酮（metyrapone）或无干预；肺应激同窝小鼠作为对照。

• 通过血浆促肾上腺皮质激素、皮质酮、肾上腺素和去甲肾上腺素水平，以及颈上神经节和肾上腺基因表达，确认全身应激激活。

• 在24小时周期内每3小时采集一次整角膜（ZT0-ZT21），进行Bulk RNA测序。使用JTK_CYCLE鉴定节律转录本；使用DEseq2进行差异基因筛选。

• 评估上皮有丝分裂、免疫细胞技术、ZO-1/occludin表达、亚基底神经结构以及Cochet-Bonnet角膜敏感性。

结果：

• RS引起节律基因广泛的相位提前和振幅减弱，下游重编程免疫、增殖和代谢通路。

• 表型上，RS增加角膜机械敏感性，降低中性粒细胞和γδT细胞计数，提高上皮有丝分裂，降低ZO-1/occludin表达，而亚基底神经长度未受影响。

• 普萘洛尔部分恢复昼夜相位对齐并改善上皮和代谢参数；美替拉酮优先增强了免疫相关基因及免疫细胞丰度。

结论：RS通过β-肾上腺素能和糖皮质激素机制破坏昼夜输出并损害上皮、免疫和代谢稳态。时间靶向这些神经内分泌通路可能成为环境应激诱导眼表功能障碍的策略。

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/41400316/

Kruppel样因子（KLF）家族成员控制组织巨噬细胞特性所需基因的表达

• 组织驻留巨噬细胞根据其所在的组织，呈现出不同的基因表达谱，并表现出功能特化。

• 最近的研究已经开始确定了诱导这些特性的信号和转录因子。

• 在本研究中，研究人员描述了广泛表达的转录因子Kruppel样因子2（KLF2）在胚胎来源的浆膜腔大腔巨噬细胞（LCMs）发育中出人意料的特定作用。

• KLF2不仅直接调控先前已表明可确定LCM特性的基因转录，如视黄醛受体和GATA6，而且对于诱导许多其他界定这些细胞特性的转录本也是必需的。

• 本研究的结果表明，KLF4可能同样调控肺中肺泡巨噬细胞的特性。

• 本研究的数据表明，像2nd组KLFs这样广泛表达的转录因子，在确定组织驻留巨噬细胞的不同特性方面可发挥重要作用。

重组血栓调节蛋白结构域1通过抑制HMGB1生成和NLRP3炎症小体，促进糖尿病性角膜伤口愈合

目的：

利用体内和体外模型，研究重组血栓调节蛋白结构域1（rTMD1）在糖尿病性角膜伤口愈合中的治疗潜力，并阐明潜在机制。

方法：

• 使用毕赤酵母表达系统生产并纯化rTMD1.

• 将人角膜上皮细胞（HCECs）在正常葡萄糖（NG）和高葡萄糖（HG）条件下培养，分为有或无rTMD1处理组。

• 通过划痕实验评估伤口愈合率。

• 通过链脲佐菌素（STZ）注射诱导C57BL/6小鼠患糖尿病。

• 知道角膜伤口并用rTMD1或PBS处理，通过荧光素染色评估伤口愈合情况。

• 通过qPCR、Western Blot和iF分析炎症标记物，包括HMGB1、TLR4、NLRP3和IL-1β。

结果：

• 在体外，与未处理的细胞相比，在高糖条件下用rTMD1处理的HCECs显示出更高色伤口愈合率（p=0.0049）。

• 在体内，rTMD1显著促进了糖尿病小鼠的角膜伤口愈合，与用PBS处理的对照组相比，在24小时（p=0.005）和48小时（p<0.0001）是伤口闭合更快。

• rTMD1处理在mRNA和蛋白质水平上降低了HMGB1、TLR4、NLRP3和IL-1β的表达，表明炎症受到抑制。

结论：

• 局部应用rTMD1通过抑制HMGB1 / TLR4 / NLRP3介导的炎症，促进糖尿病状态下的角膜上皮伤口愈合。

• rTMD1有望成为糖尿病性角膜病变的潜在治疗药物，尽管还需要进一步研究来验证其临床疗效和安全性。

缺氧会改变角膜的昼夜节律，并且破坏角膜上皮、神经以及免疫的平衡状态

目的：角膜在强大的昼夜节律控制下运行，对眼表稳态至关重要。缺氧应激在许多眼部疾病和全身性疾病中普遍存在，他会扰乱这些节律，损害上皮、神经和免疫平衡。在此，我们研究环境性缺氧（EH）和化学性缺氧（CH）如何重塑角膜生物钟基因表达和组织完整性。

方法：将雄性C57BL/6J小鼠暴露与常氧（NC）、环境性缺氧（10%氧气）或化学性缺氧（氯化钴，15mg/kg/day，腹腔注射）环境中14天。在24小时周期内，每隔3小时收集一次角膜用于Bulk RNA seq。通过Jonckheere - Terpstra - Kendall CYCLE（JTK_CYCLE）鉴定节律基因，并使用GSEA和PSEA评估通路富集情况。通过免疫荧光染色评估上皮连接蛋白（ZO-1和闭合蛋白）、神经标志物（βIII-微观蛋白）和免疫细胞（Ly6G+中性粒细胞、γδT细胞）。

结果：缺氧显著增加了节律性转录本（环境性缺氧中约增加43%，化学性缺氧中增加约35%），超过65%的节律基因出现相位偏移。化学性缺氧特异性地上调核心生物钟基因（Per1、Cry2、Nr1d2、Rora）并下调Per2,这可能是通过HIF-1α介导的机制实现的。环境性缺氧和化学性缺氧均损害了上皮屏障的完整性，降低了角膜神经密度，并改变了免疫细胞浸润，在授时因子时间18（ZT18）是破坏最为严重。此外，化学性缺氧在ZT3是独特地诱导了屏障功能障碍和免疫抑制，表明存在模型特异性的脆弱窗口。

结论：缺氧却动角膜转录组节律的模型特异性和昼夜节律相位依赖性重编程，导致结构和免疫功能协调受损。确定ZT148和ZT3为关键阶段，凸显了针对缺氧相关眼表疾病进行时辰治疗干预的潜力。

鼠尾草酸在烟曲霉角膜炎中的治疗效果与机制

真菌性角膜炎是一种威胁视力的角膜感染性疾病。然而，由于对于真菌毒力的有限以及过度的炎症反应，临床治疗药物无法达到立项疗效。鼠尾草酸（*Carnosic Acid*，**CA**）是一种酚类二萜，据报道具有抗菌、抗炎和抗氧化等多种能力。CA在真菌性角膜炎中的治疗效果和潜在机制仍不明确。本研究旨在证实CA在烟曲霉（A.*fumigatus*）引起的角膜炎中的治疗作用及潜在机制。

在本研究中，我们证明CA显著抑制烟曲霉菌丝的生长、生物膜的形成以及菌丝膜的完整性。在CA处理下，烟曲霉相关基因（RodA、RodB、FKs、Rho1、CshA - C和Cyp51A - B）的水平受到抑制。5μg/mL和10μg/mL的CA明显促进细胞增殖。在烟曲霉感染的小鼠角膜中，CA减轻了角膜损伤的严重程度，抑制了中性粒细胞募集和真菌负荷。与灭活的菌丝相比，CA下调了炎症细胞因子、Dectin-1、NLPR3、裂解的半胱天冬酶-1、IL-18和IL-1β的mRNA和蛋白质水平。此外**Curdlan**（Dectin-1的特异性激动剂）刺激可促进NLRP3、裂解的半胱天冬酶-1、IL-18和IL-1β的表达，而CA处理可下调这些表达。

总之，CA对烟曲霉具有抗真菌功能。CA通过抑制有Dectin-1和细胞焦亡调节的炎症细胞因子产生，改善了真菌性角膜炎的预后。

外周血中激活的淋巴细胞亚群作为癌症进展的潜在血液生物标志物

本研究的目的是预测淋巴细胞亚群在癌症进展中的价值。

我们从327名未治疗的癌症患者和158名健康患者中获取外周血，通过流式细胞术测定了淋巴亚群的水平。

1. 与健康对照组相比，未治疗的癌症患者中NK细胞、CD8+T细胞和原始CD4+/CD4+T细胞水平降低。反之，与健康对照组相比，癌症患者中以下T细胞百分比升高：记忆CD4+/CD4+、CD8+T细胞、HLA-DR/CD8+、CD8+、CD38+/CD8+和CD4+/CD8+。

2. 在晚期癌症患者中，CD4+T细胞计数呈下降趋势，CD8+HLA-DR/CD8+T细胞和CD8+ CD38+/CD8+细胞百分比成增加趋势。

3. 随着肿瘤阶段的进展，CD8+HLA-DR/CD8+T细胞和CD8+CD38+T细胞的百分比呈增加趋势。

4. CD4+T细胞计数与淋巴结转移呈负相关，而CD8+HLA-DR/CD8+T细胞和CD8+CD38+/CD8+T细胞百分比与淋巴细胞转移呈正相关。

5. 在存在远处转移的情况下，我们观察到NK细胞计数、CD8+HLD-DR/CD8+T细胞百分比、CD8+CD38+/CD8+T细胞百分比升高以及CD4+T细胞计数地狱不存在远处转移的情况。

总之，NK细胞、CD8+ T细胞、记忆CD4+/CD4+、原始CD4+/CD4+、CD8+ HLA-DR/CD8+、CD8+ CD38+/CD8+和CD4+/CD8+的异常水平可能是癌症发展的潜在血液生物标志物。CD4+ T细胞计数和CD8+ HLA-DR/CD8+以及CD8+ CD38+/CD8+的百分比可以预测癌症的进展。

• HLA-DR：人类白细胞抗原-DR，是一种主要组织相同性复合体（MHC）分子，与T细胞的激活有关

• 记忆CD4+T细胞：经过激活后能够长期存活的CD4+T细胞，它们能够快速响应再次遇到的相同抗原。

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7367640/

结直肠癌患者外周循环适应性免疫细胞的特征

适应性免疫细胞通过靶向和杀灭肿瘤细胞来防止实体遛的进展。然而，目前尚未有关于结直肠癌（CRC）患者外周循环适应性免疫细胞特征的全面研究，也没有研究肿瘤-淋巴结-转移分期对这些细胞的影响。

在本研究中，分析了CRC患者外周血中不同亚群的适应性免疫细胞的数量、表型和功能。我们发现CRC患者与健康对照组相比存在显著差异，包括总T细胞、辅助T淋巴细胞（Th）、细胞毒性T细胞细胞（Tc）和双阴性T淋巴细胞的绝对计数减少，总T细胞和Th中IFN-γ+细胞的比例下降，以及B细胞、浆细胞母细胞和激活T细胞的百分比增加。与早期CRC患者相比，晚期CRC患者表现出更严重的免疫衰老，着表现为CD8+初始T细胞的比例减少，这些细胞具有强的增殖能力，以及CD8+中枢记忆T细胞的比例减少，这些细胞具有免疫监视功能。CD8+和CD4+末期分化效应记忆T细胞的比例和绝对计数增加，表明免疫衰老。

本研究分析的免疫细胞特征为进一步研究提供了起点，以确定其潜在的临床意义。

本文讨论了适应性免疫细胞在结直肠癌（CRC）患者中的变化。研究发现CRC患者的外周血中适应性免疫细胞的数量和功能与健康对照组存在显著差异。具体表现为总T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞以及双阴性T细胞的数量减少，同时INF-γ+细胞的比例也减少，但B细胞、浆细胞母细胞和激活T细胞的比例增加。晚期CRC患者显示出更明显的免疫衰老，主要表现为CD8+初始T细胞和CD8+中枢记忆T细胞的减少，而CD8+和CD4+末期分化效应记忆T细胞的比例和数量增加。这些发现为进一步研究提供了基础，以探索这些免疫细胞特征对临床的潜在意义。

来源

https://www.nature.com/articles/s41598-022-23190-0

非小细胞肺癌患者外周淋巴细胞亚群绝对计数变化的临床价值

作者：Jianchun Yu

引言：免疫功能对非小细胞肺癌（NSCLC）患者的预后有重要影响。通过准确检测淋巴细胞亚群的百分比和数量，了解患者的免疫状态至关重要，这有助于评估预后情况和调整患者的治疗方案。

方法：

• 队列研究，天津中医药大学第一附属医院

• 单一平台，测定CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8、B细胞和NK细胞的绝对计数和百分比。

• 172名患者在术后接受了手术和化疗。

• 二项逻辑回归分析影响疾病进展的因素。

• 无进展生存期（PFS）采用Kaplan-Meier方法进行生存计算

• 对单变量和多变量分析分别使用了Log-rank检验和Cox比例风险回归（进入法）。

结果：

1. 与正常对照组相比，不同阶段的NSCLC患者表现出明显减少的绝对淋巴细胞计数，而淋巴细胞百分比变化不大。

2. 不同治疗对淋巴细胞的稳态有不同的影响，且效果持续时间较长。

3. 逻辑回归分析显示CD3+CD4+和CD3+CD8+可以有利于预后。

4. PFS预后因素的多变量分析显示CD3+和CD4+细胞是预测PFS的独立因素。

结论：CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、B细胞和NK细胞的绝对计数比各淋巴细胞亚群的百分比更能指示患者的免疫状态。非小细胞肺癌患者的免疫功能受损。基线绝对CD3+CD4+细胞计数较高有助于更长的无进展生存期。

http://dx.doi.org/10.1016/j.tranon.2020.100849